酰胺缩合 —— 缩合剂选择、条件与副产物
加料顺序
HATU 法通常先将羧酸、HATU 和 DIPEA 在 DMF 中预活化 5–15 分钟，再加入胺，以减少胺被 HATU 胍基化。
| 方法 | 典型条件 | 特点 |
|---|---|---|
| HATU | 酸 1.0，胺 1.1，HATU 1.2，DIPEA 3.0 equiv，DMF，室温 | 快速高效，适合位阻大、活性低的胺；价格较高 |
| EDC·HCl / HOBt | 酸 1.0，胺 1.1，EDC·HCl 1.2–1.5，HOBt 1.2，DIPEA 或 Et3N，DCM 或 DMF | 副产物水溶，后处理方便，价格低 |
| T3P | T3P（50% EA 溶液）1.5，Et3N 或吡啶 3.0 equiv，EA，室温 | 副产物水溶、消旋低，适合放大 |
| 酰氯法 | 酸 + (COCl)2 / 催化 DMF 或 SOCl2 → 酰氯，再与胺、Et3N 在 DCM 中反应 | 便宜、活性高；不适合酸敏感底物 |
常见副产物与问题
- EDC / DCC：活化中间体重排生成 N-酰基脲（EDC 时 LC-MS 中为羧酸 +155 的峰），加 HOBt/HOAt 可减少。
- HATU 过量：胺被胍基化（LC-MS 中胺 +99）。
- 手性 α-氨基酸消旋：使用 HOAt/HATU、低温、较弱的碱（如 2,4,6-三甲基吡啶）可降低。
- 苯胺等弱亲核胺反应慢：换 HATU、加热，或改用酰氯法。
后处理
EA 稀释，依次用 1 M HCl 或 10% 柠檬酸（除胺和 DIPEA，产物不含碱性基团时）、饱和 NaHCO3（除酸和 HOBt）、5% LiCl（除 DMF）、饱和食盐水洗涤，干燥浓缩。